胰島素ELISA試劑盒主要由標記試劑(R1)和固相試劑(R2)組成。標記試劑組成:吖啶翁酯標記鼠抗胰島素單克隆抗體、碟丹化鈉、牛血清白蛋白;固相試劑組成:順磁性顆粒結合鼠抗胰島素單克隆抗體、碟丹化鈉、牛血清白蛋白。
用夾心ELISA試劑盒測定人胰島素水平。用純化的人胰島素自身抗原包被微孔板制成固相抗原。將胰島素自身抗體依次加入包被的微孔板中,與HRP標記的胰島素自身抗原結合,形成抗原-抗體-酶標記的抗原復合物。洗滌后,加入TMB顯色。
胰島素ELISA試劑盒的實驗步驟及計算方法介紹:
一:本產品的使用步驟如下
1)將所需數目的板條置于板架上。。
2)用一次性吸嘴將標準品﹑質控品和樣品分別25μL加入相應的檢測孔中。
3)每孔加入25μL的酶聯物。
4)充分混合10秒,在此步驟中充分混合非常重要。
5)室溫下溫育30分鐘。
6)快速丟棄測試孔中的內容物,向每個孔中加入400μl洗滌液,將板洗三次,并在吸水紙上拍打干燥,以除去殘余液體。注:清洗過程的正確操作將顯著影響實驗的靈敏度和準確性。
7)每孔加入50μL的酶復合物。
8)在室溫下溫育30分鐘。
9)快速棄去檢測孔中的內含物,每孔加入400μL的洗滌液洗板三次,在吸水紙上拍干以除去殘余液體。
10)每孔加入50μL的底物液。
11)在室溫下溫育15分鐘。
12)每孔加入50μL的終止液終止反應。
13)在加終止液后10分鐘內于450±10nm處讀取OD值。
二:胰島素ELISA試劑盒計算結果
1)計算標準品﹑質控品和病人樣品的平均吸光度。
2)以吸光率為Y軸,濃度為X軸,按照從標準品中獲得的平均吸光率和其相對應的濃度值,繪制一條標準曲線。
3)利用樣品的平均吸光率,在標準曲線上得出其相應的濃度值,
4)自動方法:使用計算機三次方模式﹑四參數模式或雙對數函數的計算機程序可得到結果。
5)樣品的濃度可直接從標準曲線中獲得。如果樣品的濃度高于高標準,則需要進一步稀釋。計算濃度時,乘以樣品的稀釋倍數。